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AMR-100酶標儀有哪些應用
2016-1-14
來源:未知
點擊數(shù): 6033          作者:未知
  • AMR-100酶標儀有哪些應用
    一、蛋白質(zhì)濃度測定
    可見光吸收法
      1.1 Lowry法
      1.2 考馬斯亮藍法(Bradford)
      1.3 BCA法


    二、細胞增殖及細胞毒性檢測
    可見光吸收法
    2.1 終點法
    工作原理:
     2.1.1 死細胞計數(shù)
        -- 染料法:
         細胞死亡后,細胞膜通透性增高,染料可以透過。
         染料:臺盼藍,Cytorecon,PI等。
        -- 比色法:
         細胞死亡后,胞內(nèi)物質(zhì)釋放,可在培養(yǎng)基中檢出。
         檢測對象:51Cr,LDH等
     2.1.2 活細胞計數(shù)
        -- 染料法:
         活細胞的線粒體酶可以還原染料,產(chǎn)生有色產(chǎn)物。 
         染料:四氮唑鹽類(MTT,XTT,WST-1,CCK8/WST-8)等
         檢測波長:450nm(XTT,WST-1,CCK8/WST-8),490nm或570nm(MTT)
         參比波長:690nm
    2.2 動力學法 
     2.2.1 動態(tài)監(jiān)測細胞增殖和細胞毒性)
         工作原理: 
         -- 細胞增殖過程中,細胞體內(nèi)的環(huán)境由氧化環(huán)境變化成還原環(huán)境,呼吸鏈中的NADPH/NADP, 
           FADH/FAD,FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高。
         -- AlamarBlue被細胞內(nèi)吞后,在細胞質(zhì)中被上述代謝中間體還原,最后釋放到胞外。
         -- 被還原AlamarBlue的積累使培養(yǎng)基從無熒光的靛青藍轉變成有熒光的粉紅色。
         檢測波長:570nm
         參比波長:600nm
    三、細胞凋亡檢測檢測
    工作原理:
    -- 細胞凋亡的發(fā)生是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進入核小體間切割DNA,產(chǎn)生180~200bp或其數(shù)倍的
      核小體片段,而核小體由于與組蛋白形成緊密復合物而不被核酸內(nèi)切酶切割。
    -- 應用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體,與核小體片段形成夾心結構,可特異性檢測細胞溶  
      解物中的核小體片段。
    檢測方法: 
    -- 在微定量板上吸附抗組蛋白抗體,加入細胞裂解后離心所得的含有核小體的上清液,核小體上
      的組蛋白與包被的抗組蛋白抗體結合;
    -- 加入辣根過氧化物酶標記的抗DNA抗體,與核小體上的DNA結合;
    -- 加酶的底物,測光吸收值。
    檢測波長:405nm和492nm
    四、報告基因檢測
    五、信號轉導檢測
    六、活性小分子檢測
    七、內(nèi)毒素檢測
    八、過敏原檢測
    九、其他酶類檢測
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